求详细的基因表达载体的组成，要详细啊~····
完整的表达载体必须包括： 1、复制子，在细菌中扩增时所必须。 2、启动子，目的基因在细菌或细胞中转录所必须，转录了才能翻译，是谓“表达”。 3、原核筛选标记，细菌增菌所必须。 4、真核筛选标记，如果是真核表达，就是必须的。 5、多克隆位点，即酶切位点，插入目的片段的区域。 6、其他所需构件，可视实验设计情况而选用现成载体或在载体上自行添加。 基因有两个特点： 一是能忠实地复制自己，以保持生物的基本特征； 二是在繁衍后代上，基因能够“突变”和变异，当受精卵或母体受到环境或遗传的影响，后代的基因组会发生有害缺陷或突变。绝大多数产生疾病，在特定的环境下有的会发生遗传。也称遗传病。在正常的条件下，生命会在遗传的基础上发生变异，这些变异是正常的变异。 以上内容参考 百度百科——基因表达载体、百度百科——基因
如何构建一个基因的过表达载体
当拿到一个基因的DNA片段后，就需要把它导入一个载体，一方面长期保存。另一方面也需要以载体为媒介将基因导入受体细胞中。基因表达载体的构建是基因工程的核心。 常用的载体有细菌质粒，噬菌体和动植物病毒。其中质粒载体最常用。所谓载就是一个很长的环状DNA，携带一些基因，可以导入细菌中自我复制，也可以从细菌中提取出来改造。 现在我们就需要把SUN片段连到一个载体，用VectorNTI打开，研究一下用哪个酶处理，这个载体需要用Sma1这个酶切开，然后用SUN连上，替换切下来的ccdb，这里要用到两个酶，一个Sma1限制性内切酶切开，一个DNA连接酶把新片段连上，植物转基因载体和这些酶都是非常常用的试剂。 载体构建好之后需要把它们导入大肠杆菌中复制，这里就要用到大肠杆菌的感受态了，十把构建好的载体和感受态混合，然后放到42度热水处理个1分钟，再冰上放个3分钟。 这时需要一些培养细菌的培养基来培养菌们，大肠杆菌这种菌很好养活，唯一需要注意的是，灭菌过后的培养基要小心保存。把在冰上处理过的大肠杆菌放到培养基中培养一天，为了防止没有转入载体的菌也混进来，我们在载体上加入了一个抵抗抗生素的基因。 这样我们在培养基中加入这种抗生素，在里面就只有需要的大肠杆菌能生长了。最后得到了上亿个携带着含有我们的SUN基因的载体的大肠杆菌，这时就需要把质粒再提出来。 实验室里提质粒需要用专门的试剂盒，也可以简化一下，先把菌液离心让菌沉淀，然后再用水把菌打散，然后煮沸1分钟再离心，取上清，上清中加乙醇让DNA析出，再离心让DNA沉淀，最后用水把DNA溶解。这样提出来的DNA会有很多杂质以及细菌的基因组DNA。 扩展资料： 目的基因与运载体结合： 将目的基因与运载体结合的过程，实际上是不同来源的DNA重新组合的过程。如果以质粒作为运载体， 要用一定的限制酶切割质粒，使质粒出现一个缺口，露出黏性末端。然后用同一种限制酶切断目的基因，使其产生相同的黏性末端（部分限制性内切酶可切割出平末端，拥有相同效果）。将切下的目的基因的片段插入质粒的切口处。 首先碱基互补配对结合，两个黏性末端吻合在一起，碱基之间形成氢键，再加入适量DNA连接酶，催化两条DNA链之间形成磷酸二酯键，从而将相邻的脱氧核糖核酸连接起来。 形成一个重组DNA分子。如人的胰岛素基因就是通过这种方法与大肠杆菌中的质粒DNA分子结合，形成重组DNA分子（也叫重组质粒）的。 参考资料来源：百度百科-基因表达载体
为什么要先构建克隆载体再用表达载体
构建克隆载体是大量扩增DNA片段，用以测序、酶切和改造等对DNA实施的后续操作，构建表达载体是大量得到翻译产物——蛋白质。
为什么要先构建克隆载体，再用表达载体，我猜是因为：
①得到大量的DNA，虽然PCR也可以，但PCR扩增有出错率、但你每做一次常规的PCR，而且每次都要重新提DNA和RNA才行，而且，PCR反应的试剂盒又不便宜，用PCR来制备大量DNA有点得不偿失。尽管构建克隆载体也存在操作复杂（相对于PCR），成功率不是极高，而且还要筛选，但一旦你重组成功并转入了大肠杆菌，你就可以保存了，你想什么时候用，摇个菌，就可以制备到大量的DNA。
②测序需要。你想转表达，你首先得确定你扩增的目的片段是不是你要的，不要以为你设计了个特异性引物，然后跟你mark的长度就可以确定了，这也只是推测，在科学上不严谨。扩增出的基因片段保险起见或者经费允许，要拿去测序，而一般送测的序列都是构建到载体上的序列，克隆载体上一般也都带有测序引物，已确定这就是你要的那条序列。你要写论文必须要给人真凭实据。
怎么构建克隆载体和表达载体？
首先根据你的实验需要选择相应的载体
其次分析你的基因序列以及载体序列上的酶切位点，切记在载体上所选择的酶切位点要和你的基因序列上相一致，并且这两个酶切位点在你的基因序列中并不存在，否则会将基因切断
再次就是对基因和载体进行酶切了，基因要是直接用带有酶切位点的引物进行PCR的话就不用再酶切了。酶切之后进行连接，一般都有连接试剂盒的。
最后的重组质粒要转化至大肠杆菌中进行扩增，然后提取这个质粒进行酶切鉴定。